PCRin situper Maedi Visna Virus: comparazione fra tecniche "dirette" e "indirette"
Contributo in Atti di convegno
Data di Pubblicazione:
2003
Citazione:
PCRin situper Maedi Visna Virus: comparazione fra tecniche "dirette" e "indirette" / Leoni, Antonio; Sanna, Maria Paola; Farigu, Serafina; Sanna, Ennio; Nieddu, Antonio Mario S.. - (2003), pp. 60-61. (Intervento presentato al convegno 21. Convegno nazionale A.P.I.V.: atti).
Abstract:
La PCRin situ(IS-PCR) è una tecnica impiegata presso numerosi laboratori di
patologia molecolare, ormai quasi routinariamente, allo scopo di evidenziare
DNA o RNA genomico, batterico e virale.
Attualmente, le procedure utilizzate sono di tipo "diretto" o "indiretto": le prime marcano le sequenze di interesse già durante la fase di
amplificazione mentre le seconde, dopo una PCR in assenza di marcatori,
impongono il successivo impiego di sonde geniche contenenti le molecole
rivelatrici. In letteratura sono comparsi studi basati su entrambi gli approcci, ma
è opinione diffusa che le tecniche "dirette" possano causare la comparsa di
segnali aspecifici dovuti all'attività primer-indipendente della TAQ polimerasi.
Allo scopo di verificare l'affidabilità di procedure "dirette" di recente
proposizione, abbiamo eseguito prove di PCR in situ per Maedi Visna Virus su
tessuti polmonari e mammari ovini naturalmente infetti e su controlli negativi
etero- e intraspecifici. In parallelo sono state eseguite tecniche "indirette" da
lungo tempo in uso presso il nostro laboratorio.
patologia molecolare, ormai quasi routinariamente, allo scopo di evidenziare
DNA o RNA genomico, batterico e virale.
Attualmente, le procedure utilizzate sono di tipo "diretto" o "indiretto": le prime marcano le sequenze di interesse già durante la fase di
amplificazione mentre le seconde, dopo una PCR in assenza di marcatori,
impongono il successivo impiego di sonde geniche contenenti le molecole
rivelatrici. In letteratura sono comparsi studi basati su entrambi gli approcci, ma
è opinione diffusa che le tecniche "dirette" possano causare la comparsa di
segnali aspecifici dovuti all'attività primer-indipendente della TAQ polimerasi.
Allo scopo di verificare l'affidabilità di procedure "dirette" di recente
proposizione, abbiamo eseguito prove di PCR in situ per Maedi Visna Virus su
tessuti polmonari e mammari ovini naturalmente infetti e su controlli negativi
etero- e intraspecifici. In parallelo sono state eseguite tecniche "indirette" da
lungo tempo in uso presso il nostro laboratorio.
Tipologia CRIS:
4.1 Contributo in Atti di convegno
Keywords:
PCR in situ; Maedi Visna Virus
Elenco autori:
Leoni, Antonio; Sanna, Maria Paola; Farigu, Serafina; Sanna, Ennio; Nieddu, Antonio Mario S.
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